加入收藏
百奥莱博公司客服电话百奥莱博QQ百奥莱博QQ百奥莱博QQ
百奥莱博公司微信服务号

产品目录

HEPES缓冲盐溶液(pH6.7)图片
产品货号:
GL0088
中文名称:
HEPES缓冲盐溶液(pH6.7)
英文名称:
2×HeBS,pH6.7
产品规格:
100mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品是一种常用的细胞转染溶液,主要由HEPES、氯化钠、磷酸盐等组成,其最适pH值为6.7,经过滤除菌处理。影响磷酸钙转染效率的因素主要有沉淀中DNA含量、DNA在细胞上停留的时间、休克时间。HEPES缓冲盐溶液要求DNA浓度在10~50μg为宜,Hela、BALB等细胞沉淀放置16h,CHO、DUKX、BⅡ等细胞可以通过甘油、DMSO进行热休克处理以提高转染效率。




外源基因导入真核细胞的方法有很多种,如磷酸钙转染法、DEAE-葡聚糖转染法、脂质体法、电穿孔法、显微注射法等。2×HEPES缓冲盐溶液主要用于磷酸钙转染,其主要成分为HEPES,HEPES是一种非离子两性缓冲剂,能有效控制pH在6.8~8.2范围,尤其在pH7.2~7.4具有较好的缓冲能力,终浓度一般为10~50mmol/L,培养液内含20mmol/LHEPES即可达到较好的缓冲能力。


组分规格
HEPES缓冲盐溶液(pH6.7)100mL
说明书1份

保存:-20℃,有效期1年。


  • 胰蛋白酶消化液
  • PBS
  • 无菌水
  • CaCl2溶液
  • 甘油或DMSO
  • 筛选药物



  • 注意无菌操作,尽量避免污染。
  • 对于瞬时转染,可以不用乙醇沉淀的DNA。
  • 休克处理某些细胞系会使转染效率大大提高,但应注意甘油暴露过久易导致细胞死亡。
  • 转染12~24h后,可以加入终浓度为10mmol/L的丁酸钠溶液,可以提高病毒滴度。
  • 该试剂用于转染时应检测其转染效率,好的转染效率应介于30~60%之间。
  • 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。



  • 在转染前24h用蛋白酶消化培养细胞,取适量数期细胞转移至新的培养器皿中,使细胞在转染时生长状态良好。
  • 在加入DNA之前2~4h,按9mL/10cm培养皿的比例加入完全培养液,置于37℃ 5%CO2培养箱培养。
  • 取适量乙醇沉淀的DNA溶解于450μL无菌水中,加入50μL 2.5M CaCl2,并充分混匀,使Ca2+终浓度达到0.25M。
  • 用移液器一边吹打2×HeBS,一边逐滴加入配制好的DNA/CaCl2溶液(操作应迅速,一般在30~60s),并剧烈振荡5s,室温下静置20~30min以形成沉淀。
  • 取沉淀均匀加入到培养皿细胞中,轻轻晃动使沉淀于培养液充分混匀,置于37℃ 5% CO2培养箱培养4~16h。如果培养细胞为CHO、DUKX等,可以DMSO或甘油进行休克处理,转染效率会大大增加。即培养4~6h后,用2mL含10%甘油或20%DMSO的完全培养液替换当前培养液,室温下静置3min,加5mL PBS摇动混匀。
  • 去除培养液,用PBS清洗细胞2次,加入5~10mL完全培养液继续培养。
  • 对于瞬时转染,在转染的不同时间点内收集细胞并检测,一般时间多控制在12~60h以内。
  • 对于稳定转染,转染后在非选择性培养液培养18~48h,一般时间多控制在24~36h,以便外源基因表达。
  • 用胰蛋白酶消化细胞并传代,更换适当的选择培养液继续培养,没2~4d更换一次选择培养液,一般10~14d会出现目的细胞克隆。

相关搜索:HEPES缓冲盐溶液(pH6.7)2×HeBS2×HeBS,pH6.7
首页 |  关于我们 |  联系我们 |  在线咨询 |  网站地图
北京百奥莱博科技有限公司 京ICP备14007103号-3